|
В лаборатории реализованы все основные подходы и направления клеточных технологий:
выделение, культивирование и криоконсервирование
субстрат-зависимых первичных культур и клеточных линий, а также большинство современных методов анализа отдельных клеток и клеточных популяций. Нами разработано несколько оригинальных моделей позволяющих выявить роль пролиферации, миграции, межклеточных взаимодействий и взаимодействий с матриксом в образовании структур эпидермиса.
Для получения трансформированных клеточных линий, или клеток с флуоресцентной меткой используются генетические конструкты на основе лентивирусных векторов.
Методами клеточного репрограммирования нами получены несколько линий индуцированных плюрипотентных стволовых клеток (ИПСК) из ES-клеток, из соматических клеток – клеток кожи, клеток амниотической жидкости и др.
Используется метод направленной дифференцировки ИПСК в нейральные клетки, первичные половые клетки и др.
В настоящий момент осваиваются новейшие методы
редактирования генома при помощи системы CRISPR-Cas9 и системы трансгенеза Sleeping Beuty.
На протяжении 20 лет в лаборатории разрабатываются, внедряются и совершенствуются
тканеинженерные конструкции для регенеративной медицины.
Одним из направлений работы коллектива является создание моделей патологических состояний и тканевых дефектов на лабораторных животных. В данных моделях мы отрабатываем новые способы лечения различных патологий с использованием биотехнологических и клеточных препаратов.
Перечень основных методов:
- Культивирование in vitro клеток человека и животных
- Разделение клеточных популяций методом флуоресцентного и иммуномагнитного сортинга
- Анализ клеточных популяций методом проточной цитометрии
- Микроскопирование (в т.ч. флуоресцентное) клеточных препаратов, гистологических препаратов, кариологических препаратов
- Иммуногистохимическое и иммунофлуоресцентное выявление маркеров дифференцировки клеток и тканей
- Криоконсервирование (замораживание и криохранение) клеточных образцов
- Определение уровня экспрессии генов методом ОТ-ПЦР в реальном времени
- Иммуноферментный анализ (ИФА)
- Western-Blot анализ
- Анализ экспрессии генов, измерение копийности генов, определение редких фрагментов методом цифрового ПЦР
Оборудование, поддерживающее методы, используемые в работе
- Ламинарные шкафы 2 уровня биозащиты (HERAsafe, Joan)
- СО2-инкубаторы SANYO MCO, в том числе один мультигазовый, т.е. с функцией подавления кислорода.
- Просмотровые микроскопы Zeiss
- Счетчики клеток Bio-Rad TC-20
- Анализатор клеточного роста и миграции xCelligence DP (Agilent)
- Система ПЦР в реальном времени LightCycler 96
- Магнитосортер VarioMACS (Miltenyi Biotec)
- Компактный фотометр Eppendorf plus
- Cистема для анализа хемилюминесценции ImageQuant LAS 500, (Cytiva)
- Проточный цитофлуориметр Attune NxT (life Technologies)
- Многофункциональный планшетный ридер Synerg H1 (BioTek Instruments Inc.)
- Инвертированный флуоресцентный микроскоп с цифровой камерой Olympus
- Инвертированный флуоресцентный цифровой микроскоп Keyence BZ900
- Просмотровые инвертированные микроскопы (Olympus, Zeiss)
- Низкотемпературный вертикальный холодильник AWTech
- Криохранилища Thermo Locator 6 plus
- Прочее оборудование: твердотельные термостаты, центрифуги, пипетки, шейкеры в комплекте
|
Рис. 1. Работа с культурой клеток в ламинарном боксе 2-го уровня биобезопасности.
Рис. 2. Инвертированный флуоресцентный микроскоп Olympus
Рис. 3. Инвертированный флуоресцентный цифровой безокулярный микроскоп Keyence
Рис. 4. Мультигазовый СО2-инкубатор SANYO MCO (слева) и термостат (справа).
Рис. 5. Криохранилища Thermo Locator plus с коллекцией клеточных линий
|
Федеральное государственное бюджетное учреждение науки
